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介紹重組腸激酶的使用注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-04-24      點(diǎn)擊次數(shù):822
  重組腸激酶(Enterokinase,lightchain)是一種高度專一性識(shí)別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的蛋白酶,在Lys的C端水解多肽。它可以將胰蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橐让福部梢詫в羞@個(gè)識(shí)別序列的融合蛋白切開。由于腸激酶具有高度專一性,水解效率高的特點(diǎn),它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā),其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂,尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。
  腸激酶具有高度專一性,水解效率高的特點(diǎn),它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā),其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂,尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。本重組表達(dá)產(chǎn)品攜帶his標(biāo)簽,便于切割目標(biāo)蛋白后除去,保證酶切的可控性和特異性。
  重組腸激酶的注意事項(xiàng)
  在>200mM咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果受影響??蓞⒄找韵峦扑]方法進(jìn)行酶切:
  1、為獲得理想酶切結(jié)果,請(qǐng)將樣品透析到25mMTris-HCl8.0緩沖液中,再進(jìn)行酶切。
  2、若不便透析,可將樣品稀釋,咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即1U酶切500µg蛋白)。
  3、如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種,且不便去除,此時(shí)適當(dāng)增加酶量或延長(zhǎng)酶切時(shí)間,也可達(dá)到較好酶切效果。
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