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SmartCell溶酶體染色試劑盒*Blue*使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/15      點擊次數(shù):1115

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SmartCell溶酶體染色試劑盒*Blue*

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SmartCell溶酶體染色試劑盒*Blue*

C6244L0558

500 assays

-20℃

2450

 

產(chǎn)品描述

溶酶體是細(xì)胞內(nèi)具有單層膜囊狀結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器溶酶體被比喻為細(xì)胞內(nèi)的“酶倉庫”“消化系統(tǒng)”溶酶體內(nèi)含有許多種水解酶類,能夠?qū)⒓?xì)胞吞噬進(jìn)的食物或致病菌等大顆粒物質(zhì)消化成生物大分子,殘渣通過外排作用排出細(xì)胞分解很多種物質(zhì),也能在細(xì)胞分化過程中,將陷入溶酶體內(nèi)某些衰老細(xì)胞器和生物大分子消化。溶酶體膜內(nèi)pH值約4.5-4.8,使得消化酶類可以在酸性條件下工作,溶酶體外的胞質(zhì)內(nèi),pH值為7.2左右,溶酶體膜通過從胞質(zhì)泵入H+維持溶酶體內(nèi)外這種pH差異。

Smart Cell溶酶體染色試劑盒*Blue*可以標(biāo)記活細(xì)胞中的溶酶體,使之帶藍(lán)色熒光(Ex/Em =433/48nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物,屬趨溶酶體染料,染料滲透進(jìn)入完整的活細(xì)胞中有選擇性進(jìn)入溶酶體,并因溶酶體膜內(nèi)外的不同pH環(huán)境而被鎖定在溶酶體中。染料一旦進(jìn)入溶酶體,熒光顯著性增強非常穩(wěn)定?;谶@一特點,本試劑盒可以用于酶標(biāo)版、免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)等應(yīng)用,用于多種不同類型的研究中,包括細(xì)胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性的研究,適用于增殖型和非增殖型細(xì)胞,也可以用于懸浮和貼壁細(xì)胞。

Smart Cell溶酶體染色試劑盒Life-iLab公司專門研發(fā)的一類熒光成像工具,試劑盒設(shè)計嚴(yán)謹(jǐn),人為手動操作的步驟很少。用來標(biāo)記細(xì)胞器、亞細(xì)胞等結(jié)構(gòu),例如細(xì)胞膜、溶酶體、溶酶體和細(xì)胞核等。Smart Cell溶酶體染色試劑盒提供了標(biāo)記溶酶體的全套試劑,針對每種細(xì)胞結(jié)構(gòu)都能提供藍(lán)色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇,既可單獨使用,也支持對細(xì)胞的多重?zé)晒夥治?/span>。這種的細(xì)胞標(biāo)簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細(xì)胞活動提供了一種十分有效的方法。

試劑盒組分

組分

數(shù)量

Component A: LysoBrite Blue染料 

100 µL (500 X DMSO stock solution)

Component B: 活細(xì)胞染色緩沖液 

50 mL

使用方法 

1. 準(zhǔn)備溶酶體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘,預(yù)熱LysoBrite Blue染料(Component A)。 

1.2 20µL預(yù)熱好的LysoBrite Blue染料(Component A)10 mL活細(xì)胞染色緩沖液(Component B)進(jìn)行稀釋。 

注意:1) 20μL LysoBrite Blue染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實驗剩余的LysoBritBlue染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃,避免反復(fù)凍融。2)*染料濃度根據(jù)具體應(yīng)用會有不同,染色條件根據(jù)細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的染料滲透性不同可以進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化。

2. 細(xì)胞染色 

2.1 貼壁細(xì)胞:在96孔板(100μL)或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞達(dá)到70-80%融合度,在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2),在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時。用Dapi濾光片在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。

注意:如果細(xì)胞沒有充分染色,可以適當(dāng)增加染料濃度或增加染色時間進(jìn)行改善

2.2 懸浮細(xì)胞1000 rpm 條件下離心細(xì)胞培養(yǎng)液5分鐘,棄去上清,用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)液溫和的重懸細(xì)胞,然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2),在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時。用Dapi濾光片在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。

                          

 

               圖1:U2OS 細(xì)胞用SmartCell溶酶體染色試劑盒*Blue*染色后進(jìn)行成像分析

               (所用96孔板為Costar black)

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