產(chǎn)品描述

鏈霉親和素磁珠，也稱 Streptavidin 磁珠或 SA 磁珠，是粒徑為 200nm 的納米磁珠，表面共價(jià)結(jié) 合了大量的高質(zhì)量的鏈霉親和素。Streptavidin納米級(jí)磁珠由于高的表面積與體積比，會(huì)提供更多結(jié)合位點(diǎn)，磁珠使用量更少，非特異性吸附率低，可以快速、高效、靈敏、特異性地與（Biotin）標(biāo)記的抗體、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子結(jié)合。主要用于分離純化標(biāo)記的核酸、抗體、蛋白或相關(guān)復(fù)合物等，用于免疫沉淀（IP）、細(xì)胞分選、DNA-蛋白相互作用研究等。

訂購信息

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存，有效期12個(gè)月。注：避免凍融或離心磁珠。

技術(shù)參數(shù)

使用方法

（一）結(jié)合化分子操作流程

使用前自備緩沖液：以下是常用的緩沖液成分，用戶可根據(jù)需要調(diào)整鹽濃度和pH

1. 結(jié)合化核酸：

(1)  將磁珠置于漩渦振蕩器上20s，振蕩重懸磁珠。用移液器移取 100μL 磁珠到新的離心管中。將離心管置于磁力架上，靜置 1min（此操作后續(xù)簡(jiǎn)稱為磁性分離），用移液器吸去上清液，從磁力架上取下離心管。

(2)  加入1mL Buffer 1 到離心管中，蓋上離心管蓋，充分振蕩重懸磁珠。磁性分離，移去上清液。

(3)  重復(fù)“步驟 1 (2)"一次。

(4)  加入 500μL 的用 Buffer 1稀釋的化核酸，充分振蕩重懸磁珠。將離心管置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)混合 30min。

(5)  磁性分離，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管。按“步驟1 (2)"的方法洗滌磁珠 3 次。

(6)  根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求，加入合適的低鹽緩沖液，重懸磁珠。至此結(jié)合化核酸步驟完成。磁珠可用于后續(xù)操作。

(7)  用戶可以通過測(cè)定反應(yīng)前后核酸的濃度，計(jì)算結(jié)合到磁珠上的核酸量（反應(yīng)前濃度-反應(yīng)后濃度）×反應(yīng)溶液體積。

2. 結(jié)合化抗體/蛋白：

(1)  將磁珠置于漩渦振蕩器上20s，振蕩重懸磁珠。用移液器移取 100μL 磁珠到新的離心管中。將離心管置于磁力架上，靜置 1min（此操作后續(xù)簡(jiǎn)稱為磁性分離），用移液器吸去上清液，從磁力架上取下離心管。

(2)  加入 1mL Buffer 2 到離心管中，蓋上離心管蓋，充分振蕩重懸磁珠。磁性分離，移去上清液。

(3)  重復(fù)“步驟 2 (2)"兩次，共洗滌 3 次。

(4)  加入 1mL 的用 Buffer 2 稀釋的化抗體/蛋白，充分振蕩重懸磁珠。將離心管置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，室溫旋轉(zhuǎn)混合 60 min。

(5)  磁性分離，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管。按“步驟2 (2)"的方法洗滌磁珠5次。

(6)  根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求，加入合適的緩沖液，重懸磁珠。至此結(jié)合化抗體/蛋白步驟完成。磁珠可用于后續(xù)操作。

（二）化抗體免疫沉淀操作流程

1． 免疫復(fù)合物的制備：

以下實(shí)驗(yàn)方案針對(duì) 2-10ug 化抗體，根據(jù)需要可以按比例放大。

(1)    在離心管中將每個(gè)樣品的細(xì)胞裂解液與2-10ug 免疫沉淀抗體結(jié)合。每個(gè)免疫沉淀反應(yīng)推薦的總蛋白量為500-1500ug。

(2)    用IP Lysis/Wash Buffer將抗體以及制備好的樣品稀釋至 300-500μL。

(3)    在室溫下旋轉(zhuǎn)孵育1-2 h, 或 4℃ 2-4 h，以形成抗體和目標(biāo)蛋白的免疫復(fù)合物。

注：樣品所需的量和孵育時(shí)間均依賴于每個(gè)特定的抗體和抗原體系，因而可能需要優(yōu)化，以達(dá)到效果；建議使用相應(yīng)的同種亞型抗體對(duì)照，以便在你的抗體免疫沉淀中顯示特異性結(jié)合。

2． 免疫沉淀：

注：為保證磁珠均勻分布，使用前通過反復(fù)顛倒或輕微渦旋混勻瓶中磁珠。

(1) 將25-50µL 鏈霉親和素磁珠加入1.5 mL離心管中。

(2) 向磁珠中加入500 µL預(yù)冷PBS，輕柔混勻，使用磁力架分離磁珠，棄去上清。

(3) 向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer，顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1min。用磁力架分離磁珠，棄去上清。

(4) 將抗原樣品/抗體免疫復(fù)合物加入裝有磁珠的離心管中，混勻儀上室溫孵育1-2 h，或 4℃，2-4 h。

(5) 用磁力架分離磁珠，除去未結(jié)合的樣品，并保存以備分析。

(6) 向離心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻5-10min，收集磁珠，棄上清。再重復(fù)洗兩次。

(7) 變性洗脫：向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（1×），將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。通過磁力架分離磁珠，收集含有目的抗原的上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。注：當(dāng)使用的一抗檢測(cè)分子量在50或25kDa范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)時(shí)，建議使用構(gòu)象特異性二抗進(jìn)行檢測(cè)，以盡量減少抗體重鏈或輕鏈的干擾；如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脫方式：

低pH洗脫：此方法為非變性洗脫法，洗脫的樣品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向離心管中加入100 µL 洗脫液（0.1M ，pH2.5），混勻在室溫下孵育離心管5-10 min。接著置于磁力架上靜置約30s，待磁吸后，收集上清至新的Ep管，并立即加入20 μL的中和緩沖液（1M Tris-HCl，pH8.0），將洗脫產(chǎn)物pH調(diào)節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析。

注意事項(xiàng)

1.   本產(chǎn)品于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.   請(qǐng)勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會(huì)導(dǎo)致磁珠 聚集而降低結(jié)合能力。

3.   實(shí)驗(yàn)中 SA 與化分子結(jié)合的能力是有區(qū)別的，結(jié)合還會(huì)受到 Buffer 的影響，因此可自行優(yōu)化操作細(xì)節(jié)或者篩選及配制緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

4.   如需分子與 SA 磁珠分離，可采用：① 0.1% SDS，煮沸 5min；② pH=8.2，含95%甲酰胺的 10mM EDTA 中，65℃ 5min 或 90℃ 2min。脫落率 95%。

5.   磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。磁珠應(yīng)保存在儲(chǔ)存溶液中，防止干燥。

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本產(chǎn)品于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。