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  • 細(xì)胞凍存液分類與選擇

    2022-04-24 細(xì)胞凍存是細(xì)胞生物學(xué)研究及藥物研發(fā)細(xì)胞實驗中需要經(jīng)常面對的常規(guī)操作。隨著細(xì)胞越來越嬌,人工越來越貴,各種細(xì)胞凍存液應(yīng)運(yùn)而生,如何從名目繁多的細(xì)胞凍存液中選擇變成一個問題。本文從細(xì)胞凍存液分類,應(yīng)用場景,使用效果等多方面加以闡釋,希望能對如何選擇細(xì)胞凍存液有所助益。一、細(xì)胞凍存液的分類從成分劃分(1)滲透性和非滲透性滲透性保護(hù)劑分子量小可滲透到細(xì)胞內(nèi),如甘油、DMSO、乙二醇等,其在細(xì)胞冷凍存*凝固之前,滲入細(xì)胞內(nèi),降低細(xì)胞內(nèi)外溶液中的電解質(zhì)濃度,阻止細(xì)胞內(nèi)水分外滲,避免細(xì)胞過...
  • 細(xì)胞凍存液原理及配制方法

    2022-04-22 細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時凍...
  • PEI轉(zhuǎn)染試劑是非常有潛力的非病毒質(zhì)粒載體試劑

    2022-03-28 分子生物學(xué)的發(fā)展使得大量致病基因被鑒定,科學(xué)家在這些研究成果的基礎(chǔ)上發(fā)展了基因治療。基因治療是利用基因載體將治療基因?qū)牖颊唧w內(nèi),進(jìn)而表達(dá)功能蛋白以達(dá)到治療的目的。基因治療傳遞DNA面臨的挑戰(zhàn)之一是外源治療基因會被體液和胞外空間的核酸內(nèi)切酶降解。治療基因在目標(biāo)組織中的選擇性積累、細(xì)胞內(nèi)化以及從溶酶體逃逸這些問題對所有核酸治療劑都是需要克服的。DNA必須輸送至細(xì)胞核以允許獲得轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。因此,設(shè)計和制備安全高效的基因載體來壓縮并且保護(hù)治療基因以免被核酸內(nèi)切酶降解并延長其在體內(nèi)的...
  • 基因組DNA提取原理說明

    2022-03-24 DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學(xué)研究的主要對象。所以基因組DNA提取實驗是分子生物學(xué)最基本實驗之一。今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來的時間了還會介紹動物基因組DNA的提取步驟。DNA.RNA和核苷酸都是極性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑,它們的鈉鹽比游離酸易溶于水,RNA鈉鹽在水中溶解度可達(dá)40g/L.DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中,DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細(xì)...
  • 蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶

    2022-03-21 蛋白酶,顧名思義,降解蛋白的酶,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。在RNA提取中,蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶,防止RNA的降解。蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué),藥理學(xué)等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性。一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類的統(tǒng)稱蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶...
  • 介紹牛血清白蛋白常見的問題解決方法

    2022-01-21 牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中,因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后,它可能起到保護(hù)或載體作用,不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言,牛血清白蛋白可以使酶切更*,并可實現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃,酶切反應(yīng)超過1h時,牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定,因為在不含牛血清白蛋白的反應(yīng)緩沖液中,許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...
  • 外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色

    2022-01-07 外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破,要將其用于臨床治療,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)面臨很大的挑戰(zhàn)。外泌體(exosome)是細(xì)胞分泌囊泡(extracellularvesicles)的一種亞型,存在于生物體液中,并參與多種生理和病理過程。外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞間通信的一種新機(jī)制,允許細(xì)胞交換蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和遺傳物質(zhì)。過去,細(xì)胞分泌的外泌體一度被認(rèn)為只是參與廢物排泄;現(xiàn)在,隨著高通量蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)的發(fā)展,外泌體被廣泛認(rèn)為是生物體內(nèi)細(xì)胞間短距...
  • 介紹細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的幾種檢測方法

    2021-11-28 細(xì)胞凋亡與壞死是兩種*不同的細(xì)胞凋亡形式,根據(jù)死亡細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別,可以將二者區(qū)別開來。細(xì)胞凋亡的檢測方法有很多,下面介紹幾種常用的測定方法。根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征,人們已經(jīng)設(shè)計了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。1、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡(1)未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。(2)染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、...
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