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核酸純化的方法及原理
2022-08-19
核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗成敗的關(guān)鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提...
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化學(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)
2022-07-22
在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)至的發(fā)光現(xiàn)象?；瘜W(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程。學(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來建立的微量測定技術(shù)，因此該技術(shù)靈敏度高、線性范圍寬、應(yīng)用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...
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PCR原理及反應(yīng)步驟
2022-07-21
PCR的原理：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)簡稱PCR技術(shù)，是近30多年發(fā)展起來的一種體外擴增特異性DNA片段的技術(shù)，可在數(shù)小時之內(nèi)對僅有幾個拷貝的基因放大千萬倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術(shù)實際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應(yīng)條件下，通過DNA聚合酶的酶促反應(yīng)完成DNA擴增的過程。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。PCR反應(yīng)分為三步：1)變性：通過加熱時DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，...
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影響重組腸激酶活性的因素有哪些
2022-07-20
腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達的融合蛋白（識別位點是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構(gòu)成，二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時對基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強。天然腸激酶來源有限，且從動物組織提...
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一圖讀懂細胞轉(zhuǎn)染那些事-part1
2022-06-30
簡析各類細胞轉(zhuǎn)染方法細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。定義隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個維度，介紹細胞轉(zhuǎn)染的各類小知識。一、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達的蛋?正確折疊并進行復(fù)雜修飾，表達的蛋?更接近真實自然狀態(tài)，便于模擬真實細胞內(nèi)環(huán)境，進行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞，表達?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（構(gòu)建穩(wěn)定細胞系），如圖...
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RNA提取方法總結(jié)
2022-06-22
這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時分離出細胞染色體DNA.本法對于冷凍時間長、細胞質(zhì)和細胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動物細...
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如何選擇核酸染料
2022-05-27
科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎？帶您認識幾款優(yōu)秀的核酸染料一、李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料。據(jù)不*統(tǒng)計，有強烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢占據(jù)核酸染料使用量多，在眾多的EB替代染料中，名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國Biotium公司的GelRed,GelReen染料，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名，要么是國內(nèi)不成熟的仿品，安全性毫無保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBR...
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細胞增殖及細胞活力檢測方法
2022-05-25
一、細胞增殖與細胞活性細胞增殖是活細胞的重要?理功能之?，細胞增殖與細胞活性檢測所用的方法相近，但實驗?zāi)康牟煌?。細胞增殖是通過細胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)判斷細胞的數(shù)量變化，例如細胞計數(shù)法，反應(yīng)的就是細胞真實的數(shù)量。而細胞活性檢測，則是通過檢測細胞受到藥物或其他措施處理后，標(biāo)志物產(chǎn)量或濃度的變化，進而判斷藥物或處理措施的作用，細胞活性檢測所得結(jié)論，往往反映了實驗設(shè)計的目的。細胞增殖檢測，因檢測標(biāo)志物的不同，目前大致分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度...
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