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  • PEI轉(zhuǎn)染試劑:基因遞送的高效載體

    2024-09-11 在分子生物學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域,基因遞送是實(shí)現(xiàn)基因功能研究、基因治療和生物制藥等應(yīng)用的關(guān)鍵步驟。PEI(Polyethylenimine,聚乙烯亞胺)轉(zhuǎn)染試劑,作為一種高效、經(jīng)濟(jì)的基因遞送工具,正在這一領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。一、PEI轉(zhuǎn)染試劑:基因遞送的優(yōu)選PEI轉(zhuǎn)染試劑,是一種基于聚乙烯亞胺的非病毒基因遞送載體。它能夠與DNA形成復(fù)合物,通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,并在細(xì)胞內(nèi)釋放DNA,實(shí)現(xiàn)基因的高效遞送。PEI轉(zhuǎn)染試劑具有以下顯著優(yōu)勢(shì):高效轉(zhuǎn)染:PEI具有較高的正電荷密度,能夠有效與...
  • 外泌體是細(xì)胞間通訊的重要媒介

    2024-09-09 外泌體,這個(gè)在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域中逐漸嶄露頭角的神秘角色,正影響著我們對(duì)細(xì)胞通訊和疾病機(jī)制的理解。外泌體是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150nm的小囊泡,具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)。它們就像一個(gè)個(gè)精心包裝的小包裹,里面攜帶著多種重要的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等。這些物質(zhì)不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起著關(guān)鍵作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。外泌體存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中1。它們能夠很好地保護(hù)其包被的物質(zhì),并且能...
  • sirna轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟與轉(zhuǎn)染試劑推薦

    2024-09-06 sirna轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟(以24孔板為例)1.接種細(xì)胞對(duì)于貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天,將細(xì)胞按照每孔1-2x10^5個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板,使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為60%-80%為佳。對(duì)于懸浮細(xì)胞:轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前,用PBS清洗細(xì)胞1-2次,用250μLOpti-MEMI減血清培養(yǎng)基(無(wú)血清)重懸細(xì)胞,在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板,細(xì)胞密度為60-80%。2.準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物(或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復(fù)合物)(1)對(duì)于每孔細(xì)胞,取2μLsiRNA(20μM,DEP...
  • 從實(shí)驗(yàn)室到臨床:無(wú)血清細(xì)胞存凍液的轉(zhuǎn)化應(yīng)用之路

    2024-08-26 在生物醫(yī)學(xué)研究和細(xì)胞治療領(lǐng)域,細(xì)胞的長(zhǎng)期保存與復(fù)蘇是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的細(xì)胞冷凍保存技術(shù)多依賴于含血清的培養(yǎng)基,但血清來(lái)源的不確定性及可能引入的污染,限制了其在某些領(lǐng)域的應(yīng)用。無(wú)血清細(xì)胞存凍液作為一種新興的細(xì)胞保存解決方案,為細(xì)胞冷凍保存技術(shù)開(kāi)辟了新的篇章。本文將深入探討無(wú)血清細(xì)胞存凍液的原理、優(yōu)勢(shì)及其在細(xì)胞保存領(lǐng)域的重要性。無(wú)血清細(xì)胞存凍液是一種專為細(xì)胞冷凍保存設(shè)計(jì)的無(wú)血清、無(wú)蛋白的保存液。它通常含有細(xì)胞保護(hù)劑,如二甲基亞砜(DMSO)、乙二醇等,這些成分能夠減少細(xì)胞在冷...
  • 李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(蛋白Marker的分類與選擇)

    2024-08-23 蛋白Marker即蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn),是幾種已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物,像“尺子”一樣用來(lái)指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在WesternBlot實(shí)驗(yàn)中,蛋白Marker主要是用來(lái)指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小,此外,蛋白Marker還可以用來(lái)輔助判斷蛋白轉(zhuǎn)膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進(jìn)度等作用,所以選擇合適的蛋白Marker也是實(shí)驗(yàn)成功的重要條件之一。李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)預(yù)染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量,以上2個(gè)圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為SDS-PAG...
  • 無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作方法

    2024-08-21 無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作方法主要包括細(xì)胞的收集、離心、凍存液的加入、分裝、凍存以及后續(xù)的解凍與復(fù)蘇等步驟。以下是詳細(xì)的操作方法:一、細(xì)胞的收集與離心細(xì)胞收集:使用常規(guī)方法收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞。對(duì)于貼壁細(xì)胞,可以使用胰酶或EDTA等試劑進(jìn)行消化,使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落,然后收集到試管或離心管中。細(xì)胞離心:將收集到的細(xì)胞懸浮液置于離心管中,進(jìn)行離心處理以收集細(xì)胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000rpm,4℃,持續(xù)35分鐘。注意,離心時(shí)應(yīng)確保溫度適宜,以...
  • 蛋白酶K的酶學(xué)特性及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的重要性

    2024-08-17 蛋白酶K,屬于一種廣譜蛋白酶,由白色念珠菌(Candidaantarctica)發(fā)酵產(chǎn)生。它能夠在較寬的pH值范圍內(nèi)(pH4-12)保持活性,且在高溫條件下(65℃)仍能穩(wěn)定工作,這種穩(wěn)定性使蛋白酶K能夠在多種實(shí)驗(yàn)條件下發(fā)揮其作用,成為科研人員手中的得力助手。在分子生物學(xué)領(lǐng)域,蛋白酶K的應(yīng)用尤為廣泛。在DNA提取過(guò)程中,蛋白酶K能夠高效地降解細(xì)胞和組織中的蛋白質(zhì),包括那些與DNA緊密結(jié)合的組蛋白,從而釋放出純凈的DNA,為后續(xù)的PCR擴(kuò)增、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的DNA模板。此...
  • RIPA裂解液介紹與如何選擇

    2024-08-15 提到蛋白提取,大家不約而同會(huì)想到RIPA裂解液,裂解液加入樣品中,離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對(duì)了嗎?RIPA裂解液是從動(dòng)物細(xì)胞或組織中提取蛋白的常用裂解液,其工作原理是利用去污劑(表面活性劑)裂解細(xì)胞膜和核膜,從而獲取細(xì)胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的選擇RIPA裂解液中主要包含去污劑,緩沖體系,等滲體系,變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細(xì)胞裂解液中重要成分,是由疏水尾端基團(tuán)和極性親水頭端基團(tuán)組成的兩性分子,它們能夠降低水的表面張力,所...
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